細(xì)胞特性與應(yīng)用

永生化小鼠遠(yuǎn)端小管 KDT3 細(xì)胞是研究腎臟功能和藥物代謝的有力工具，具備無(wú)限增殖能力，可用于腎臟疾病機(jī)制探索、毒性評(píng)估及藥物篩選。

培養(yǎng)基配制

推薦使用 DMEM 或 RPMI-1640 培養(yǎng)基，添加 10% 胎牛血清、1% 青霉素 - 鏈霉素溶液，根據(jù)需求可補(bǔ)充 1% 地塞米松，調(diào)節(jié) pH 至 7.2 - 7.4。

細(xì)胞復(fù)蘇

從液氮中取出凍存管，37℃水浴快速解凍，轉(zhuǎn)移至含 9 ml 預(yù)熱培養(yǎng)基的離心管，1000 rpm 離心 5 分鐘，棄上清，重懸細(xì)胞后接種至培養(yǎng)容器，置于 37℃、5% CO? 培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

傳代操作

細(xì)胞生長(zhǎng)至 80% - 90% 匯合時(shí)傳代。用 PBS 洗滌，0.25% 胰蛋白酶 - 0.02% EDTA 消化 1 - 2 分鐘，顯微鏡下觀察細(xì)胞脫落情況，加入含血清培養(yǎng)基終止消化，吹打制成細(xì)胞懸液，按 1:2 - 1:3 比例分裝至新容器，加入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存

取生長(zhǎng)良好的細(xì)胞，胰蛋白酶消化制成懸液，與含 10% DMSO 的胎牛血清按 5×10? - 1×10? cells/ml 混合，分裝至凍存管，程序降溫盒 -80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)移至液氮罐保存。

常見(jiàn)問(wèn)題解決

細(xì)胞污染

污染來(lái)源多樣，預(yù)防措施包括使用無(wú)菌試劑、超凈工作臺(tái)操作、定期換液觀察。污染發(fā)生時(shí)需立即停止培養(yǎng)，更換新細(xì)胞。

生長(zhǎng)緩慢

可能因培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)不足或環(huán)境不穩(wěn)定導(dǎo)致。檢查培養(yǎng)基成分新鮮度與配比，確保培養(yǎng)箱溫濕度、CO? 濃度穩(wěn)定。

形態(tài)異常

或與消化過(guò)度、培養(yǎng)環(huán)境變化相關(guān)。優(yōu)化消化時(shí)間，避免損傷；穩(wěn)定培養(yǎng)條件，減少環(huán)境波動(dòng)。