細胞來源與背景

源自 42 歲女性 WHO Ⅰ級腦膜瘤手術(shù)標本，術(shù)后 4 h 內(nèi)完成原代培養(yǎng)。病理確認 PR 陽性、Ki-67 指數(shù) 3%，無 NF2 突變。經(jīng)兩輪有限稀釋法獲得單克隆，命名為 iMen-001，STR 指紋與 ATCC 數(shù)據(jù)庫比對無交叉污染。

永生化元件整合方式

雙元件采用 PiggyBac 轉(zhuǎn)座系統(tǒng)一次性共轉(zhuǎn)染：

• SV40 LT：cDNA 全長 2.4 kb，插入位點 chr7:128,456,789，深度測序拷貝數(shù) 1.8

• hTERT：cDNA 3.5 kb，插入位點 chr5:1,253,467，拷貝數(shù) 2.0

Southern blot 顯示無隨機整合片段，PCR 檢測無游離型質(zhì)粒殘留。

生長動力學參數(shù)

表型保留數(shù)據(jù)

• 免疫熒光：EMA、Vimentin、PR 陽性率 > 95%；GFAP、S100 陰性

• 電鏡：可見典型橋粒連接與復雜指狀突起

• 染色體：46,XX，未見克隆性異常；第 22 號染色體單體比例 < 3 %

功能驗證

• 激素受體：孕激素受體 Western blot 條帶 116 kDa 清晰；雌激素受體陰性

• 藥物反應：米非司酮 IC?? 4.2 μM；羥基脲 IC?? 0.8 mM

• 遷移：劃痕實驗 24 h 愈合率 38 %，Transwell 8 h 侵襲細胞數(shù) 215 ± 18

支原體與無菌檢測

每批次放行標準：

• qPCR 支原體檢測 Ct > 35

• 14 d 培養(yǎng)基無細菌、真菌渾濁

• 內(nèi)毒素 < 0.1 EU/mL

凍存與復蘇條件

• 凍存液：90 % FBS + 10 % DMSO

• 降溫程序：–1 °C/min 至 –80 °C，液氮長期保存

• 復蘇存活率：臺盼藍法 91 ± 3 %

• 復蘇后 24 h 貼壁率：95 %

推薦培養(yǎng)體系

• 基礎培養(yǎng)基：DMEM/F12 (1:1)

• 添加劑：10 % FBS、1 % NEAA、2 mM L-Glu、1 mM 丙酮酸鈉

• 培養(yǎng)環(huán)境：37 °C、5 % CO?、濕度 95 %

• 傳代比例：1:3–1:4，使用 0.05 % Trypsin-EDTA 2–3 min

質(zhì)量控制批次報告樣本

批次 iMen-001-20250618：

• 生長曲線 R2 > 0.99

• 支原體陰性

• STR 與 iMen-001 原代比對 100 % 匹配

• 軟瓊脂克隆 0 個 > 50 μm