分子骨架：IGHG2 基因編碼的 330 個氨基酸

• 恒定區(qū)起自 Ala114，終止于 Lys443，包含 CH1-鉸鏈-CH2-CH3 四段

• 鉸鏈區(qū)僅 12 個氨基酸，比 IgG1 短 7 個，形成更緊湊的“剛性桿"，影響 FcγRIIa 結(jié)合角度

• 第 12 位 Cys 形成額外二硫橋，重鏈-輕鏈連接更耐還原劑，DTT 2 mM 處理 30 min 仍保持 95 % 完整性

→ 設(shè)計還原型電泳實驗時，把 DTT 提高到 50 mM 才能全斷開 IgG2 特殊橋接

糖型占比：G0F 高達 60 % 的生理含義

• IgG2 的 N297 糖鏈以 G0F 為核心，半乳糖基化率低于 IgG1 20 %

• 低半乳糖導(dǎo)致 FcγRIIIa 親和力下降一個數(shù)量級，ADCC 活性天然偏弱

• 巖藻糖缺失突變體（afucosylated）可把 ADCC 拉高 30 倍，但熱穩(wěn)定性 Tm 值降低 2.4 °C

→ 若采購低巖藻糖 IgG2 標準品，要求 COA 給出糖型百分比，誤差范圍 ±2 %

亞類對照活性：CDC 與 ADCP 的基準值

• 人血清 CDC 實驗：IgG2 的 CH50 單位 8.3 U/mg，IgG1 為 24 U/mg

• ADCP 檢測：U937 細胞吞噬指數(shù) 1.8，高于 IgG1 的 1.2，適合研究巨噬細胞導(dǎo)向

• 與 C1q 結(jié)合 KD 1.8 μM，是 IgG1 的 1/5，補體激活閾值需 50 μg/mL 以上

→ 做功能對比時，把 IgG2 濃度拉高 3 倍，否則 CDC 信號淹沒在背景里

質(zhì)控閾值：單體、聚集體、片段三選一

• SEC-HPLC 單體 ≥ 98 %，聚集體 ≤ 1.5 %，片段 ≤ 0.5 %

• NR-CE-SDS 重鏈+輕鏈總量 ≥ 95 %，游離輕鏈 ≤ 2 %

• 還原 CE-SDS 重鏈純度 ≥ 98 %，非糖化重鏈 ≤ 1 %

→ 提交 IND 時，把這三張圖譜訂成一份 PDF，F(xiàn)DA 審評員習(xí)慣先看峰面積表

熱穩(wěn)定性：Tm 值與保存期限的換算

• CH2 域 Tm 71 °C，CH3 域 82 °C，鉸鏈緊湊讓整體 Tm 比 IgG1 高 1.5 °C

• 40 °C 加速 4 周，聚集體增長 ≤ 0.3 %，可反推 4 °C 真實有效期 36 個月

• 反復(fù)凍融 5 次，Tm 下降 0.8 °C，對應(yīng)單體損失 0.9 %，低于行業(yè) 1 % 紅線

→ 若運輸途中超溫 25 °C 持續(xù) 72 h，補做加速實驗，合格方可放行

親和力常數(shù)：FcγR 家族對照表

• FcγRIa：KD 8 nM，1:1 結(jié)合，可用于 SPR 陽性對照

• FcγRIIa-H131：KD 1.2 μM，R131 變異體 3.4 μM，基因型不同信號差 3 倍

• FcγRIIIa-V158：KD 3.7 μM，F(xiàn)158 變異體 12 μM，直接決定 ADCC 窗口

→ 寫實驗方案時，把受體基因型寫進材料欄，避免細胞系差異導(dǎo)致數(shù)據(jù)無法復(fù)現(xiàn)

內(nèi)控參比：建立實驗室“金批"

• 選三批 EU GMP 級 IgG2，混池后分裝 200 μg/管，-80 °C 保存

• 每季度取一支跑 SEC-HPLC，峰面積 RSD ≤ 1 % 視為系統(tǒng)穩(wěn)定

• 新到貨批次先與金批做差值圖譜，Δ 面積 ≤ 0.5 % 方可入庫

→ 金批用完前 6 個月啟動新一輪混池，保持量值溯源鏈不斷

單位換算：mg、IU、OD280 三表速查

• 1 mg IgG2 = 1.35 IU WHO 國際標準 15/174

• A280 1.38 對應(yīng) 1 mg/mL，光程 1 cm，比 IgG1 稍低 2 %

• 摩爾消光系數(shù) 210 000 M^-1cm^-1，做 FortéBio 定量時直接代入 1:1 模型

→ 寫 SOP 把換算常數(shù)寫死，避免實驗員每次手算帶來 3 % 誤差