1. 它到底叫什么？

行業(yè)里同一支抗體至少有五個(gè)名字：Goat Rabbit IgG、山羊抗兔IgG、山羊抗兔IgG二抗、山羊抗兔二抗、貨號(hào) A23420。

它們指向同一類試劑：山羊宿主、靶向兔 IgG 全分子的二級(jí)抗體。叫法不同只是渠道習(xí)慣，選的時(shí)候認(rèn)準(zhǔn)“Goat anti-Rabbit IgG (H+L)"即可，避免買到只識(shí)重鏈或輕鏈的片段。

2. 工作原理：一場(chǎng)“接力賽"

• 第一棒：兔源一抗識(shí)別組織里的目標(biāo)蛋白

• 第二棒：山羊抗兔 IgG 二抗帶著酶/熒光基團(tuán)跑過(guò)來(lái)，F(xiàn)c 段與一抗的 Fc 高親和結(jié)合

• 第三棒：顯色或發(fā)光系統(tǒng)被激活，信號(hào)放大 103–10? 倍

關(guān)鍵點(diǎn)：二抗的交叉吸附（cross-adsorbed）決定背景干凈與否。優(yōu)質(zhì)批次會(huì)把人、小鼠、大鼠血清跑 4 遍，把能交叉反應(yīng)的 IgG 先“洗掉"，留下只認(rèn)兔 IgG 的克隆。

3. 選購(gòu)指南：5 個(gè)參數(shù)直接問(wèn)銷售

4. 收到抗體后 10 分鐘內(nèi)的“體檢"

1. 離心 5 000 g，5 min，看沉淀；有絮狀說(shuō)明反復(fù)凍過(guò)

2. 分裝 20 µL/管，加 50 % 甘油，–20 °C 避潮；甘油濃度低于 30 % 冰晶會(huì)扎破抗體

3. 原始管保留 10 µL“底樣"，后續(xù)出問(wèn)題可做 Western 對(duì)照

5. 稀釋比例不是“玄學(xué)"

廠家寫 1:5 000 只是起點(diǎn)。把二抗從 1:2 000 到 1:20 000 做 4 個(gè)梯度，固定一抗?jié)舛?，選信噪比最高的那個(gè)點(diǎn)。多數(shù)情況下，HRP 二抗在 1:8 000 附近背景較低，熒光二抗在 1:1 000 左右亮度飽和。

6. 背景高？先查“三個(gè) 5"

• 5 % 脫脂奶粉封閉 1 h，奶粉過(guò)期會(huì)結(jié)塊，封閉失效

• 5 分鐘 TBST 洗 5 次，每次 200 mL 膜面積；洗膜液體積低于 100 mL 時(shí)游離二抗洗不掉

• 5 ng/mL 的兔 IgG 污染：實(shí)驗(yàn)室共用搖床，上一組兔血清灑落，二抗直接“粘"上去。用 0.1 M 甘氨酸 pH 2.5 先洗機(jī)器，再跑實(shí)驗(yàn)

7. 熒光版“淬滅"急救

Alexa 系列遇甘油會(huì)慢淬滅，封片后 4 °C 避光保存不超過(guò) 48 h。急著拍圖卻淬滅，可用 0.5 % 對(duì)苯二胺（p-phenylenediamine）溶于 PBS-甘油，抗淬滅延長(zhǎng)到 1 周。

8. 舊批次再利用

過(guò)期 6 個(gè)月內(nèi)的 HRP 二抗，別扔。Western 轉(zhuǎn)成 ELISA 捕獲抗體，包被量提高到 2 µg/mL，照樣能做標(biāo)準(zhǔn)曲線，信號(hào)值下降 <15 %，省一支新抗體。